Lipotoksik endoplazmik retikulum stres sonucu ifadesi değişen mikrornaların tanımlanması ve regüle ettiği genlerin analizi
No Thumbnail Available
Files
Date
2014
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Biyoteknoloji Enstitüsü
Abstract
Obezite, tip 2 diyabet ve ateroskleroz gibi metabolik düzensizliklerde serbest yağ asitleri, yağ dokusunun yanısıra başka dokularda da birikmektedir. Hücre içindeki serbest yağ asidi birikimine karşı koyamayan -yağ doku harici dokulardaki- hücrelerde Endoplazmik Retikulum (ER) stres ve lipotoksik hücre ölümü gerçekleşir. Katlanmamış Protein Yanıtı (KPY) hücrede biriken serbest yağ asitlerinin endoplazmik retikulumda meydana getirdiği stres durumuna karşı koymak için aktive olan bir mekanizmadır ve hücrenin ER'da oluşan strese karşı koyarak adaptasyonu veya hücrenin kendini apoptoza programlaması arasında anahtar rolü üstlenmektedir. Ancak, uzun süren ve çözümlenemeyen ER stresi, hücreler ve dokular için zararlıdır, ER stresi metabolik dokularda kronikleştigi zaman, metabolik hastalıkların gelişimine yol açmaktadır. Lipotoksisitenin KPY'nı hangi moleküler mekanizmalarla aktifleştirdiği ve KPY sinyal yolağının adaptif veya destrüktif yanıtlarının nasıl kontrol edildiği halen tamamen aydınlatılamamıştır. Son yıllarda tanımlanan ve gelişim, organogenez, kök hücre statüsünün idamesi, kanser gibi biyolojik süreçlerde rol alan mikroRNAların (miRNA), protein kodlayan genlerin yaklaşık %30-60'ını kontrol ettikleri tahmin edilmektedir. Lipotoksik ER stres kaynaklı KPY aktivasyonu sırasında ifadesi değişen miRNAları tanımlamak amacı ile fare makrofaj hücre hattında (RAW 264.7), lipotoksik ER stres oluşturulmuş ve ardından bu hücreler ve kontrol hücre hattının miRNAome profilleri, QRT-PCR temelli miScript miRNA PCR array kullanılarak biyolojik tekrarlı analiz edilmiştir. miRBase 16.sürümdeki tüm fare miRNAları ile yapılan taramada 227 adet miRNAnın ifade seviyesinde değişiklik gözlenmiş, 43 tanesinde 2 kat ve üzeri artma/azalma gözlenirken, 13 adetinde ise 3-24 kat artma/azalma görülmüştür. Lipotoksik ER streste ifadesi değişen bu miRNAların hedef transkriplerini belirlemek için yolak analizleri yardımı ile olası hedef mRNAlar belirlenmiş ve QRT-PCR ile ifade seviyeleri analiz edilmiştir.
Description
Keywords
Biyoteknoloji, Lipotoksik endoplazmik retikulum, Obezite