Rejeneratif ve rekonstrüktif tıp uygulamaları için deselülerize insan dermal hücre dışı matriksini içeren deri greftlerinin 3B baskı teknolojisi kullanılarak üretimi

Abstract

Tez çalışmasının amacı, 3 boyutlu (3B) biyo-baskılama teknolojisi kullanarak hücresizleştirme (deselülerize) işlemi sonucunda elde edilen insan derisi hücre dışı matriksini (HDM) içeren hibrit greftler üretmektir. Estetik cerrahi uygulamalarını içeren ameliyatlar neticesinde elde edilen ve aseptik koşullarda laboratuvara getirilen insan deri dokusunun dermis tabakası enzimatik reaksiyonlarla epidermisten ayrılmış ve dört farklı protokol kullanılarak hücrelerinden uzaklaştırılmıştır. Doğal dokuya kıyasla DNA miktarı azalan, doku bütünlüğünün bozulmasına imkan vermeyen ancak kollajen ve glukozaminoglikan oranı doğal doku ile benzer sonuçlar veren IV numaralı protokol ilerleyen aşamalarda kullanılmak üzere seçilmiştir. Karşılaştırmalı FTIR grafiği incelendiğinde ise doğal doku ve HDM'nin kimyasal bağ ve fonksiyonel grup içeriği açısından oldukça benzer olduğu tespit edilmiştir. 3B biyo-baskılama işleminde mürekkep olarak kullanılmak üzere enzimatik reaksiyonlar neticesinde elde edilen HDM esaslı hidrojel (%1), aljinat (%2) ve jelatin (%8) ile karıştırılmıştır. Mikro ekstrüzyon yöntemi kullanılarak 1.8 bar basıncı ve 6.5 mm/s hız ile atış yapılmış ve 5 katlı ızgara şeklinde baskılar (0.480 mm kalınlığında ve 3cmX3cm boyutlarında) elde edilmiştir. Elde edilen 3B hibrit greftin karakterizasyonu ise mekanik dayanıklılık, şişme, biyo-bozunurluk ve biyo-uyumluluk açısından değerlendirilmiştir. 3B hibrit grefti maksimum 4 kPa çekme dayanımı sergilerken 0.1 gerinim değeri ile %10 uzama sergilemiştir. Maksimum dayanım değeri ise 7 kPa olarak belirlenmiştir. Biyo-bozunurluk analizleri sonucunda 3B hibrit HDM greftinin yapısal bütünlüğünü koruduğu belirlenmiştir. Biyo-uyumluluk analizleri kapsamında ise insan keratinosit hücre hattı kullanılmıştır. 7 günlük inkübasyon neticesinde Live-Dead ile F-aktin-DAPI boyamaları gerçekleştirilmiştir. Lazer taramalı konfokal mikroskobunda gerçekleştirilen analizler neticesinde hücrelerin 7 gün süresince 3B hibrit greftin üzerinde canlı kalabildikleri ve normal morfolojilerine ulaşabildikleri gözlemlenmiştir.