Aldehit grubu fiksatiflerin fiksasyon potansiyelinin immünflüoresan teknik ile süper çözünürlük mikroskobunda değerlendirilmesi

Abstract

Fiksasyon, hücre ve doku ile ilgili yapılan çalışmalar için ön basamaktır. Çalışılacak örneğin yapısına uygun fiksatifin seçilmesi bu işlemi etkin kılacak bir özelliktir. İmmünhistokimyasal çalışmalarda en çok kullanılan fiksatifler Paraformaldehit ve Formaldehit olmakla birlikte son yıllarda fiksatiflerle ilgili yapılan çalışmalara kullanımı nadir ve eski olan Gliyoksal eklenmiştir. Bu fiksatiflerin hücre ya da dokulara uyumlu çalışmasını ortamın hidrojen iyonu konsantrasyonu ve ısısı, fiksatifin konsantrasyonu, osmolaritesi ve doku ya da hücre penetrasyonu etkilemektedir. Çalışmamızda ticari olarak satın alınan GMP kalitesindeki insan göbek kordonu stroması kaynaklı kök hücreler kullanmış ve PFA, FA ve Gly ve bir iyonik olmayan deterjan Triton X-100'ün farklı kokteylleri halinde hazırlanarak fikse edilmiş ve hücrelerin belli yerlerinde lokalize olan proteinler işaretlenerek fiksatiflerin fiksasyon potansiyeli, boyanma deseni ve sinyal şiddeti ölçümlerine göre lazer taramalı süper çözünürlük konfokal mikroskobunda gözlemlere dayalı kalitatif ve kantitatif olarak değerlendirilmiştir. Sonuç olarak, Gly gruplarında arka plan ve spesifik olmayan boyanmalar gözlenmiş ve FA gruplarında Gly'ye göre daha iyi bir boyanma deseni ve güçlü bir sinyal oluşumu belirgindir. Bu durumda Gly fiksasyonunun PFA veya FA'ya göre üstün yönleri olmadığı ve FA hücre fiksasyonu sırasında kullanılabilir bir fiksatif olabileceği saptanmıştır