Meme kanseri hücrelerinde hsp70 inhibisyonunun antiksanser etkilerinin araştırılması
Özet
Hsp70, yeni sentezlenen proteinlerin katlanması, yanlış katlanmış proteinlerin yeniden katlanması, protein agregasyonunun önlenmesi, hücre içi protein taşınması gibi fizyolojik rollere sahip bir şaperondur. Sağlıklı hücrelerde makul düzeylerde sentezlenen bu protein tümörlü hücrelerde aşırı miktarda sentezlenerek tümör hücrelerinin zorlu şartlarda hayatta kalmasına yardımcı olur. Hsp70, tümörlü hücrelerde apoptozun engellenmesi, kemoterapiye karşı direnç, metastaz, invazyon gibi kötü prognozla ilişkili birçok süreçte rol oynar. Dolayısıyla tümörlü hücrelerde Hsp70'in spesifik olarak inhibe edilmesi kanser tedavisinde önemli bir stratejidir. Ayrıca Hsp70'in inhibe edilmesi tümör hücreleri için toksik etki gösterirken, normal hücrelerde bu etki görülmez, dolayısıyla kanser tedavisindeki sistemik toksisitenin önlenmesinde Hsp70 inhibisyonu büyük önem taşımaktadır. Bu çalışmanın amacı Hsp70 inhibisyonunun antikanser etkilerinin araştırılması ve Hsp70 üzerinde yapılan nokta mutasyonlarının protein fonksiyonunu ne şekilde etkilediğini araştırmaktır. Çalışmada öncelikle Hsp70 NBD üzerindeki inhibitörlerle etkileşen kritik bazı amino asitlerde nokta mutasyonu yapılarak inhibitör/protein etkileşimine ait bağlanma katsayılarının ve minimum inhibitör konsantrasyonlarının ne şekilde değiştiği moleküler simülasyon çalışmaları (doking) ile belirlenmiştir. Ayrıca saflaştırılan Hsp70 ve mutant Hsp70 proteinleri inhibitörlerle ayrı ayrı etkileştirilerek ATP hidroliz ve lüsiferaz katlama deneyleri yapılmıştır. Veriler, yapılan nokta mutasyonları sonucunda mutant proteinlerin ATP hidroliz ve lüsiferaz katlama aktivitelerinde kontrol grubuna göre belirgin bir azalma olduğunu göstermiştir (p<0.05). İkinci olarak inhibitörlerin MCF-7 hücre hattı üzerindeki antikanser etkileri ve kullanılacak dozlar XTT yöntemi ile belirlenmiştir. İnhibitörlerin Hsp70i protein miktarları üzerindeki etkileri ise ELISA yöntemi ile belirlenmiştir. ELISA sonuçları inhibitörlerin MCF-7 hücrelerindeki Hsp70i miktarını kontrol grubuna göre artırdığını göstermiştir (p<0.05). Son olarak PES'in MCF-7 hücrelerinin gen ekspresyon profilini ne şekilde değiştirdiği PCR array yöntemleri ile araştırılmış ve PES'in kanserle ilişkili yolaklardaki birçok genin ekspresyonunda değişmeye neden olduğu sonucuna varılmıştır. Bütün deneysel veriler göz önüne alındığında bu çalışmanın kanser tedavisi için inhibisyon alanında bilimsel bilgi birikimi ve daha ileri çalışmalar için alt yapı sağlayacağı düşünülmektedir.