Echinococcus granulosus protoskolekslerinin in vitro ortamda gelişimi ve protein yapılarının sds-page yöntemi ile belirlenmesi

Abstract

Hidatidozis, Echinococcus cinsine ait türlerin larva sekillerinin (metacestod) insan ve hayvanlarda olusturdugu, hem saglık hem de ekonomik yönden oldukça önemli, zoonotik bir hastalıktır. Türkiye'de hidatidozdan sorumlu Ekinokok türlerinden en yaygın olanı Echinococcus granulosus'dur. Bu çalısmada koyun kökenli hidatik kistlerden elde edilen protoskolekslerin monofazik in vitro kültürde kistik yönde gelisiminin incelenmesi ve in vitro kültür sonucunda elde edilen mikrokistlerin protein yapılarının SDS ? PAGE yöntemiyle belirlenmesi amaçlandı. Çalısmada in vitro kültür ortamında protoskolekslerden veziküler ve arka keseli formların gelistigi, daha sonra bu iki formunda etrafında laminar tabakanın sekillenerek formların mikrokist haline geldikleri gözlendi. n vitro kültürde gelisen formlar 152 gün boyunca takip edildi ve kültür sonunda çapları ortalama 2561 ?m olan mikrokistler elde edildi. Çalısmada kültürde gelistirilen mikrokistlerin kist sıvısı ve koyunlardan elde edilen hidatik kistlerin sıvısı SDS ? PAGE yöntemiyle elektroforeze tabi tutularak protein yapıları ortaya kondu ve iki kist formunun protein yapıları karsılastırıldı. n vitro kültürde gelistirilen mikrokistlerin elektroforezinde daha önceki çalısmalarda hastalıga spesifik olarak bulunan ve koyun kökenli hidatik kistlerde de bulunan 8, 20, 45, 68, 116 kDa'luk protein bantlarına rastlanılması, in vitro kültürde elde edilen mikrokistlerin de antijenik degerinin yüksek oldugunu ve çesitli teshis metotlarında ve ası gelistirme çalısmalarında iyi bir antijen kaynagı olarak kullanılabilecegini ortaya koymustur. Ayrıca pek çok çalısmada model olarak kullanılabilecek in vitro kültürde gelistirilmis bu kistler arakonaklardan kist bulma zorlugununda asılmasını ve deney hayvanı kullanımının azaltılmasına katkı saglayacaktır.AbstractHidatidosis is economically very important zoonotic disease and also at medical aspects that is occured by larval stages of Echinococcus spp. In Turkey, Echinococcus granulosus is the most common species releated to hidatidosis. In this study it?s aimed that inspection of cystic development of protoscoleces in monophasic in vitro culture and determination of protein structures extracted from microcysts at the end of the in vitro culture by SDSPAGE. It?s monitored that vesicular and posterior bladder forms are developed from protoscolex in vitro culture, and these two forms are developing to microcysts by covering with laminated membran. Developing forms in vitro culture were observed 152 days and end of the culture, microcysts were obtained with 2561 ?m awarage diameter. In the study, the protein structure of cystic fluid of microcysts developed in vitro culture and of hidatic cysts develop in sheeps were determined by SDS-PAGE and their protein aspects were compared. In the protein structure analysis of microcysts, the protein bands in 8, 20, 45, 68, 116 kDa weight were seemed observed also in hidatic cysts of sheeps exemined in the several researchs; this result indicated that microcysts are very important antigenic source that can be used for investigation of detection methods and vaccination programs. In addition, microcysts production by in vitro cultivation provide easier alternative to cyst production in laboratory animals and to cysts collection from intermediated hosts that has mostly difficulty in these aspect.