Toxoplasma gondii antijenlerinin karakterizasyonu
Özet
Toxoplasma gondii dünyada yaygın olarak görülen ve toksoplamoza yol açan parazittir. T. gondii zorunlu hücre içi yerlesim göstermektedir ve insanlar dahil tüm sıcak kanlıları enfekte etmektedir. nsanlarda özellikle immun yetmezligi olanlarda ciddi klinik belirtiler meydana getirmektedir. Konjenital bulas sonucunda olusabilecek hidrosefali, intrakranial kalsifikasyon ve korioretinit gibi önemli klinik tablolarla gelecek nesli tehdit etmektedir. Hayvanlarda meydana getirdigi düsüklerle de hayvancılıgın yaygın oldugu ülkelerde ekonomik kayıplara yol açmaktadır. Tanısı direkt olarak PCR ile yapılırken, dolaylı tanı referans test olan Sabin-Feldman boya testi, IHA, ELISA ve IFA gibi serolojik testlerle konmaktadır. Serolojik testlerde saptanan antikorların titresi, sentezlenmelerine yol açan antijen yapısıyla iliskilidir, bu yüzden farklı suslardaki antijen yapılarının incelenmesi önem tasımaktadır. Bu çalısmada T. gondii'nin üç susu kullanılmıstır ve aralarındaki farklılıklar incelenmistir. Çalısmada kullanılan suslar RH, Ankara ve TS-4 suslarıdır. RH ve Ankara susu virulan olup fare peritonu içine inoküle edilerek üretilmislerdir. TS-4 susu avirulan olup, Vero hücre kültüründe üretilmistir. Yeterli miktarda üreme olduktan sonra takizoitler alınmıs ve parçalanmıstır. Parçalanan takizoitlerin protein içerikleri Bradford yöntemiyle saptanmıstır. Yogunlastırmak amacıyla liyofilize edilen suslar ardından SDS- PAGE ile yürütülmüslerdir. Yürütülen antijenler gümüsleme ile boyanmıs ve ortaya çıkan bantlar standart protein ladder ile karsılastırılmıstır. Karsılastırma sonucunda RH ve Ankara suslarının aynı antijenik yapıları içerdigi gözlenmistir. Avirulan TS-4 susu ise daha farklı ve genel olarak diger iki virulan susa oranla daha az miktarda antijen yapısına sahiptir. Abstract Toxoplasma gondii is a worldwide parasite causing toxoplasmosis. T. gondii is an intracellular protozoon that infects all warm blooded animals including humans. t may cause severe clinical disorders especially in immunsupressed humans. Congenital transmission of T. gondii may result in severe clinical symptoms like hydrocephalus, intracranial calsification and chorioretinitis threatening new generations. Economical losses in stockbreeding countries may be seen because of abortus in animals. Direct diagnostic method is PCR and indirect methods are serological tests such as IHA, IFA, ELISA and a known reference test Sabin- Feldman dye test. As detected antibody titers in serological tests are correlated with antigens that cause synthesis of antibodies, it is important to know antigenic structure of different strains. In this study three strains of T. gondii were used and differences were examined. RH, Ankara and TS- 4 strains were used. RH and Ankara strains which are virulent were inoculated to peritoneal cavity of mice. TS- 4 strain is avirulent and produced in Vero cell culture. After enhanced growth tachyzoites were taken and broken down. Protein concentration was detected by Bradford method. After concentration by lyophilisation they were run on SDS- PAGE gel. After polichromatic silver stain antigens were compared by using a standard protein ladder. After comparison RH and Ankara strains were seen to have the same antigenic structure. Avirulent TS-4 strain is different from the others and has much less quantity of antigens.