BAZI EKSTREM TERMOFİL ANAEROBİK BAKTERİLERİN ALKALİ PROTEAZLARININ ÖZELLİKLERİNİN BELİRLENMESİ
Göster/ Aç
Yazar
GHEORGHİU ALPAN, Leila (Yazar)
DÖNMEZ, Sedat (Tez Danışmanı)
Üst veri
Tüm öğe kaydını gösterÖzet
Bu çalışmada çeşitli sıcak su, çamur ve toprak örneklerinden izole edilmiş olan bazı ekstrem termofil anaerobik bakteriler alkali proteaz aktiviteleri bakımından incelenmiştir. Test edilen 36 suş arasından Raman (Batman, Türkiye) petrol kuyusundan izole edilen, Ç olarak kodlanan ve Techirgiol (Köstence, Romanya) çamur banyosundan izole edilen, RÇ3 olarak kodlanan iki bakterinin ekstraselüler alkali proteaz enzimi üretikleri saptanmıştır. Bu enzimlerin üretim koşulları ile karakteristik özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Ç ve RÇ3 logaritmik gelişimlerini sırasıyla 32 ve 42. saatte tamamlamışlardır. Yapılan çalışmada Ç ve RÇ3’ün optimum gelişme sıcaklığı ve pH’ları sırasıyla 65°C, 55°C ve 9.0, 9.5 olarak belirlenmiştir. Gelişme sırasında maksimum alkali proteaz aktivitesi Ç için 42. satte 91.3 U/ml, RÇ3 için ise 46. saatte 78.5 U/ml olarak belirlenmiştir. Enzimlerin optimum sıcaklığı ve pH değeri; Ç için 70°C ve pH 9.5, RÇ3 için 65°C ve pH 9.0 olarak bulunmuştur. 70°C’de 2 saat inkübasyondan sonra Ç izolatı enzim aktivitesinin %20’sini, 65°C’de RÇ3 ise %45’ini kaybetmişlerdir. Bakteriler, Ç izolatı için, karbon kaynağı olarak maltoz, azot kaynağı olarak pepton ve kazein karışımı; RÇ3 izolatı için ise, laktoz ve soya unu içeren besiyerlerinde maksimum gelişme göstermişlerdir. Maksimum alkali proteaz üretimi Ç için, maltoz, pepton ve kazein karışımında, RÇ3 için ise laktoz ve kazein hidrolizat içeren besiyerlerinde meydana gelmiştir. Alkali proteaz aktivitesi, besiyerine 2 mM CaCl2 ilavesi ile, sırasıyla Ç için %136 ve RÇ3 %142 oranla artmıştır. Kaba enzim sıvısına, Ç için Ca2+ ve Mn2+ , RÇ3 için Fe3+ ve Co2+ iyonları ilavesi ile enzim aktivitesi artmıştır. Ç için Co2+ ve Cu2+, RÇ3 için ise Zn2+ ve Mn2+ iyonları ilavesi enzim aktivitesini azaltmıştır. EDTA ilavesi ile Ç ve RÇ3 izolatları için enzim aktivitesi sırasıyla %51 ve %45 oranına düşmüş, PMSF ilavesi ile her iki enzim aktivitesi de %90’dan daha büyük oranda inhibe olmuştur.