Özgün bir ışık kontrollü T7-promotoru-GFP ifade sisteminin geliştirilmesi ve GFP ifadesinin incelenmesi
No Thumbnail Available
Files
Date
2019
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Biyoteknoloji Enstitüsü
Abstract
Mikrobiyal biyoteknolojinin önemli alanlarından biri sentetik biyoloji ve genetik mühendisliği araçları kullanılarak mikrobiyal hücre fabrikaları ile rekombinant protein üretimidir. Sentetik biyoloji araçları birçok vektör ve genetik devreyi içermektedir. Bu çalışmada pDawT ve pATG adı verilen iki farklı genetik mühendisliği aracı olan vektör üretilmiş ve test edilmiştir. Bu iki vektör aynı mikrobiyal hücre içerisine ko-transforme edilip pDawT+pATG genetik devresi tamamlanmıştır. pDawT plazmidinden T7 RNA polimeraz enzimi ~400nm uzun dalga UV ışığı indüklenmesi ile üretilmekte ve üretilen T7 RNA polimeraz, pATG plazmidi üzerinde bulunan PT7 promotorundan, bu promotorun kontrol ettiği genin transkripsiyonunu başlatmaktadır. Bu çalışmada E. coli DH5α bakterisinde, PT7 kontrolünde EGFP üretilmiş ve hücreler FITC filtresinde floresan mikroskop ile görüntülenmiştir. Görüntülenen hücrelerin RGB ve HSV piksel yoğunluğu ve dağılımı analiz edilmiş ve karşılaştırılmıştır. Üretilen pDawT+pATG genetik devresi ile birçok farklı bakteri veya mayada kullanılabilecek özgün bir optokontrollü rekombinant protein üretim aracı üretilmiştir.
Description
Keywords
T7-promotoru-GFP, GFP ifadesi, FITC