Yeşil floresan protein ifadeleyen escherichia coli hücre fabrikalarda fenotipik heterojenitenin adaptasyona etkisi
No Thumbnail Available
Files
Date
2021
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Biyoteknoloji Enstitüsü
Abstract
Gelişen Biyoteknoloji uygulamalarının getirdiği en büyük katkılardan biri heterolog protein üretimidir. Sentetik biyoloji ve genetik mühendisliği sayesinde heterolog protein eldesi için kolay manipüle edilebilen, hızlı, düşük maliyetli ve yüksek verimli mikrobiyal hücre fabrikaları üretimi mümkün hale gelmiştir. Mikrobiyal hücre fabrikalarından elde edilen birçok kimyasal ve bileşen, endüstriyel ve sağlık sektörleri başta olmak üzere birçok alanda rol almaktadır. Hücre fabrikaların oluşturulmasında kullanılmak üzere kurgulanan hücrelerin gürbüz, yüksek biyokütle ve verime sahip olmalarının yanında ürettikleri peptidlerin fonksiyonel ve çözünür nitelikte olmaları büyük önem taşır. İfadelenecek gen her ne kadar rasyonel tasarımlarla hücreye aktarılmış olsa da hücre bankalarının istenilen özelliklerde oluşturulması büyük ölçüde evrimsel süreçler ile mümkün olmaktadır. Bu tez çalışmasında, T7 promotörü kontrolünde yeşil floresan protein üreten ΔrecA ve ΔmutS genotipe sahip E. coli hücre fabrikaları elde edilmiştir. Hücrelerin düşük ve yüksek heterolog rekombinant protein ifade heterojenitesi gösterdikleri fermantasyon koşulları optimize edilmiş ve bu koşullarda pasajlar boyunca indüklenen kültürlerin proteomik ve genomik parmak izi profillemesi yapılmıştır. Böylece, genetik olarak stabil ΔrecA bakteriler ile nokta mutasyonlar geliştirmeye yatkın ΔmutS hücre fabrikalarının adaptasyon hızları karşılaştırılmıştır.
Description
Keywords
Adaptasyon, moleküler klonlama, heterolog protein ekspresyonu