Farklı toxocara vitulorum antijenlerinin elde edilmesi ve enfeksiyona spesifik antikorların saptanması
Abstract
Bu çalışmada, Türkiye’de şimdiye kadar dışkı, kolostrum/süt ve otopsi bakıları ile bildirilen ve hala bazı yörelerde buzağılarda sorun olabilen T. vitulorum’un serodiagnozu amaçlandı. Toxocara vitulorum’la doğal enfekte buzağı serumlarında, hazırlanan biri larva (Ex) diğeri olgun (Pe) antijenle humoral immun yanıt araştırıldı. Araştırmanın laboratuar çalışmalarında gerekli materyallerin (dışkı, kan, parazit) sağlanması için önce saha çalışmalarına yoğunlaşıldı ve T. vitulorum ile enfekte hayvanlar arandı. Değişik 22 ilden; yaşları 0-6 aylık; halk elinden, özel ve resmi kurumlardan; yerli, kültür ırkı ve melez; her iki cinsiyetten 2393 buzağıya ait dışkı Fulleborn doymuş tuzlu su flotasyon yöntemi ile kontrol edildi. Yirmi sekiz örnekte (% 1,17) T. vitulorum yumurtalarına rastlandı. Ankara, Düzce ve Erzurum illerine ait dışkılarda enfeksiyona rastlandı, resmi kurumlara ait dışkıların hiç birinde yumurta görülmedi. McMaster tekniği ile gram dışkı yumurta sayısı en fazla 10250 olarak belirlendi. Toxocara vitulorum larva (Ex) antijeni hazırlanmasında; dışkıdan ve olgun parazitlerden elde edilen yumurtalar oda sıcaklığında gelişmeye bırakıldı. Larva gelişimi 17-40 günde tamamlandı. Yumurta kabuğu soyularak, dışarı çıkması sağlanan larvalar 448,4 (452,6-516,6) µm boyda 20,1 (14,7-24,6) µm ende ölçüldü. Toxocara vitulorum olgun (Pe) antijeni hazırlanmasında; kendiliğinden veya ilaç verilerek düşürülen erkek ve dişi parazitler kullanılarak, perienterik sıvı çekildi. Elde edilen larvalardan (Ex), perienterik sıvıdan (Pe) antijenleri seçilen yönteme uygun olarak hazırlandı. Spektrofotometre ile (Ex) antijeni için protein konsantrasyonu 7,5 mg/ml, (Pe) antijen için 20,56 mg/ml olarak belirlendi. SDS-PAGE’le elektroforetik separasyonda (Ex) antijeninde moleküler ağırlıkları 14-150 kDa, (Pe) antijeninde ise 12-141 kDa arasında değişen protein bantları elde edildi. Toxocara vitulorum (Ex) antijenlerinin negatif serumlarla (4 saha, 3 fötal) immunoblotting analizinde hiçbir örnekle reaktif bant saptanmazken, pozitif 6 serumda 14, 35, 56, 63, 68 ve 94 kDa molekül ağırlığındaki protein bantlarının immunoreaktif oldukları tespit edildi. 14 kDa’luk bant bazı örneklerde daha belirgin izlendi. (Pe) antijen ile yapılan immunoblotting çalışmasında negatif serumların (2 saha, 4 fötal) söz konusu antijenlere reaktif olmadıkları, pozitif 6 serumun ise tüm örneklerde 96 ve 110 kDa’luk 2 proteine benzer yoğunlukta reaktif oldukları tespit edildi.